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Lise는 그리스어이며 단순히 "분할하다"또는 "분해하다"를 의미합니다. 세포를 분해하여 내용물을 추출하는 용액 인 용해 완충액에서 세포와 함께 발생하는 반응에 대한 좋은 설명입니다. 과학자들은 이러한 솔루션을 사용하여 특히 박테리아의 경우 세포 분석에서 DNA 또는 단백질을 추출합니다. 세포 용해 버퍼의 유형은 실험 유형에 따라 다르지만 몇 가지 일반적인 선택 사항을 언급 할 것입니다.
버퍼와 소금
완충액은 pH를 안정화시키고 세포는 용해 과정을 거치게됩니다. tris-HCL 용액은 pH가 필요한 경우 pH 8에서 버퍼링을위한 가장 일반적인 버퍼입니다. HEPES는 이러한 실험에서 또 다른 일반적인 버퍼 솔루션입니다. 염화나트륨은 또한 이온 강도, 세포 외부 용질의 총 농도를 높이기 위해 첨가 할 수 있습니다. 후자는 용질 농도가 낮은 지역에서 고농도 지역에 이르기까지 모든 세포막으로 물이 퍼질 수 있기 때문에 중요합니다.
세정제
세제는 내용물이 빠져 나갈 수 있도록 세포막을 용해시키는 주성분입니다. 세제는 양친 매성 분자입니다. 즉, 한쪽 끝이 물 분자와 쉽게 상호 작용하는 반면 다른 소수성 끝 또는 "물을 두려워하는"쪽은 이러한 상호 작용을하지 않습니다. 그들은 세제 분자의 소수성 꼬리가 지방 분자를 가리키는 작은 그룹 인 미셀을 형성하여 지방을 용해시킬 수 있습니다. 일반적인 세제는 나트륨 도데 실 설페이트 또는 SDS, NP-40 및 tritonX입니다.
킬레이트 제 및 억제제
용해 완충액은 일반적으로 에틸렌 디아민 테트라 아세트산 (EDTA) 또는 레 틸렌 글리콜 테트라 아세트산 (EGTA)과 같은 킬레이트 제를 포함합니다. 이러한 화학 물질은 +2 전하 (예 : 마그네슘 및 칼슘)로 금속 이온에 결합하므로 다른 반응에는 사용할 수 없습니다. 많은 DNA (DNA를 씹는 단백질)와 프로테아제 (다른 단백질을 절단하는 단백질)가 작동하려면 마그네슘 이온이 필요합니다. DNAse 활동의. 그러나 그들은 완전히 배제하지 않으며 일부 프로테아제는 마그네슘 보조 인자에 의존하지 않으므로 용해 완충액에는 때때로 프로테아제 억제제라고 불리는 물질이 포함되어있어 결합하여 제대로 작동하지 않습니다.
알칼리 용해
알칼리 용해는 박테리아에서 플라스미드를 정제하는 매우 일반적인 기술입니다. 이 방법은 세 가지 솔루션의 사용을 의미합니다. 첫 번째는 포도당, 트리스 -HCL 버퍼, EDTA 및 RNAses를 포함합니다. 포도당은 박테리아 외부에 고농도의 용질을 생성하여 약간 연 약해져 용해 과정을 촉진합니다. EDTA와 tris-HCL은 이전에 설명한대로 작동하지만 RNAse는 세포 내부의 모든 RNA를 씹어 서 방해를받습니다. 두 번째 솔루션은 효과적으로 세포 용해를 수행합니다. 여기에는 세제 SDS와 NaOH가 포함되어 pH를 12 이상으로 높이고 세포 내부의 단백질을 변성시켜 DNA가 단순한 필라멘트로 분리되도록합니다. 세 번째 용액에는 칼륨 아세테이트가 포함되어 pH를보다 중성 수준으로 복원하여 플라스미드 DNA 가닥이 함께 모일 수 있습니다. 한편, 변성 된 단백질이 모여 침전되고, 도데 실 설페이트 이온은 칼륨 이온과 결합하여 불용성 화합물을 형성하며, 용액에서 침전 될 수도 있습니다.