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결핵은 Mycobacterium tuberculosis라는 세균에 의해 유발되는 전염병이며, 폐의 결절 형성, 괴사, 농양, 섬유증 및 석회화를 특징으로하는 호흡기 질환입니다. 또한 신장, 림프절, 뼈, 관절 및 피부를 감염시킬 수 있습니다.
이 간균의 일차 실험실 진단에는 현미경으로 박테리아를 시각화하기 위해 염색하는 것이 포함됩니다. 선택한 샘플은 호흡기 감염 또는 실제 조직 샘플을 식별하기위한 객담 또는 기관지 폐포 세척입니다.
생리학
Mycobacterium tuberculosis는 막대 모양의 유기체 (바실리)로, 비 이동성이며 필수가 아닌 포자입니다. 이 박테리아는 길이가 0.4x3 마이크로 미터이고 15 ~ 24 시간마다 이분법 (생식 세포 분열)을 겪으며 이는 다른 박테리아에 비해 느린 것으로 간주됩니다. 이 때문에 마이 코박 테 리움이 배양 배지에 나타나는 데 최대 9 주가 걸릴 수 있습니다.
이 유기체는 자외선과 열 (예 : 저온 살균)에 민감하지만 화학 소독제에는 내성이 있습니다.
그람 염색
Mycobacterium tuberculosis는 실제로 그람 양성 또는 그람 음성으로 분류 될 수 없습니다. 이 분류는 박테리아의 세포벽에있는 펩티도 글리 칸의 양을 기준으로합니다. 그람 양성 종은이 분자의 두꺼운 층 (약 90 %)을 가지고있는 반면, 그람 음성 종은 얇은 층 (5 %에서 20 %)을 가지고 있습니다. 그람 염색은 세포벽을 관통하여 그 안의 화학 성분에 결합합니다. 현미경으로 얼룩진 박테리아는 보라색이나 분홍색으로 변합니다.
결핵균의 경우 세포벽은 펩티도 글리 칸으로 구성되지만 그람 염료 침투를 억제하는 복합 지질로 구성됩니다. 세포벽은 또한 산이나 알코올에 의한 변색에 저항하기 때문에 마이 코박 테 리움을 "내산성"이라고합니다. 세포벽 지질은 mycolic acid, string factor 및 D-wax입니다. 박테리아가 염색되면 세포는 그람 양성이거나 색이 거의없는 약간 창백 해 보일 것입니다.
박테리아를 확인하려면 Aumarine 또는 Zhiel-Neelson 염색과 같은 특수 염색을 사용해야합니다.
오 마린-로다 민 염색
auramine-rhodamine을 사용하는 공정은 노란색 형광 염료를 사용하여 형광 현미경으로 결핵균을 시각화합니다. 과망간산 칼륨 또는 아 크리 딘 오렌지를 조영제로 사용할 수 있습니다. 렌즈 아래에서 박테리아 세포가 녹색으로 나타납니다.
auramine-rhodamine 염료는 Zhiel-Neelson보다 민감하고 경제적입니다.
Ziehl-Neelson 색칠
Ziehl-Neelson 염색은 과학자 Franz Ziehl과 Friedrich Neelsen에 의해 만들어졌으며 고농도의 산-알코올 인 가열 된 carbol-fuchsin과 녹색 말라카이트 또는 메틸렌 블루와 같은 대조 염료를 사용합니다. 형광 현미경 하에서 박테리아 세포는 밝은 분홍색으로 나타납니다.
Ziehl-Neelson 염료는 결핵균과 나병균의 예비 동정을위한 우수성의 표준입니다.
한천
현미경의 확인에 이차적으로, 결핵균은 특별한 한천 배양에서 배양되어야합니다. Lowenstein-Jensen 젤라틴에는 복잡한 유기 물질 (예 : 계란 및 감자), 소금, 글리세롤 및 말라카이트 그린 (다른 박테리아를 억제 함)이 있습니다. 미생물 오염을 더욱 억제하기 위해 항생제를 첨가 할 수 있습니다. 샘플을이 한천에 놓고 박테리아는 3 ~ 9 주 안에 성장합니다.
알부민 및 비오틴과 같은 영양 배양 용액은 가장 적은 양의 표적 박테리아의 성장을 지원하는 데 사용할 수 있습니다. 이것은 Middlebrook 7H9 (또는 7H12)로 알려져 있습니다.
두 매체 모두에서 식민지는 작고 광택이 나는 밝은 갈색 식민지로 나타납니다.
첨단 기술을 통해 이제 자동 판독기를 사용하여 결핵균을 증식시킬 수 있습니다. Middlebrook 7H9 배지의 액체 용액과 형광 지시약 화합물을 사용하여 성장을 모니터링하고 양성 또는 음성 감염을보고합니다.