아가로 오스 젤 만드는 법

동영상: 1% 아가로스젤 만들기 첫번째 영상 (1% Agarose gel preparation)

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아가 로즈 겔의 제조
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아가로 오스 겔은 분자 생물학 실험실에서 일하는 과학자들이 실험 작업 중에 수정 된 DNA 조각을 연구하기 위해 만들어졌습니다. 아가로 오스 겔을 만드는 기술은 확인 및 유전자 복제 프로젝트를 위해 다양한 크기의 DNA를 직접 시각화 할 수 있으므로 모든 연구자가 습득해야하는 기본적인 일상 기술입니다. 겔 준비는 모든 실험실 절차와 마찬가지로 어렵지는 않지만 생물학적 위험 때문에 과학적으로 훈련받은 전문가 만 시도해야합니다.

지침

아가로 오스 젤 만드는 법 (Comstock 이미지 / Comstock / 게티 이미지)

아가 로즈 겔의 제조

젤베이스에 균열이나 뜨거운 아가로 오스가 누출 될 수있는 것이 없어야합니다. 70 % 알코올로 쟁반을 청소하고 완전히 말리십시오. 받침은 두 개의 열린 끝과 두 개의 닫힌 끝을 가지고 있습니다. 일부 형식에서는 끝을 닫기 위해 클립이 제공되지만 대부분은 열린 부분 사이에 테이프 스트립을 넣어 밀봉해야합니다. 테이프가 홀더에서 빠져 나와 뜨거운 아가로 오스가 누출 될 수 있으므로 테이프를 단단히 단단히 누릅니다.
분리하고 아가로 오스 겔에서 분석 할 DNA 단편의 크기에 근거하여 필요한 적절한 백분율을 결정하십시오. 예를 들어, 1 % (w / v)에서 아가 로스 겔은 0.5 ~ 10 kb DNA 분절의 분석에 효과적입니다. 백분율 (아가로 오스가 많을수록)이 높을수록 분리 될 수있는 조각이 작아집니다. 통상적 인 실험은 0.5 % ~ 2 %의 아가 로스를 사용한다. 1 % 아가 로스 겔의 경우, 화학적 드레싱 또는 기타 봉쇄 시스템에서 1 g 아가로 오스 파우더의 무게를 잰다. 겔의 실험실 준비 영역으로 조심스럽게 옮기십시오.
적절한 겔 준비 구역에서 100ml의 전기 영동 완충액을 측정한다. 실내 온도에 있어야합니다. 아가로 오스 파우더를 내화 플라스크에 옮기고 측정 된 부피의 전기 영동 완충 용액을 부어 넣는다. 전자 레인지에서 부드럽게 혼합물을 가열하지만 증발은 아가로 오스의 비율을 바꿀 수 있기 때문에 끓이지 않습니다. 모든 아가로 오스가 용해되었는지 확인하고 완전히 흔들어 흔들어 약간 식히고에 티듐 브로 미드 1 밀리리터 당 0.5 마이크로 그램을 더합니다. 폐와 점막 조직을 자극 할 수 있으므로 증기를 흡입하지 마십시오. 또한 ethidium bromide가 첨가 된 후 용액을 가열하지 마십시오. 다시 흔들어서 혼합 한 다음 용액이 쏟아 질 정도로 뜨겁지 만 준비된 바닥에 용액을 분배합니다. 다량의 샘플 또는 작은 농도의 DNA가 존재할 경우 두꺼운 젤을 만들 수 있습니다. 그러나 미세한 젤은 더 명확하게 사진을 찍기 때문에 분석하기가 더 쉽습니다.
빗을 젤에 넣고 샘플을 넣을 홈이나 우물을 만듭니다. 몇 시간 동안 실온으로 냉각 시키거나 몇 분 동안 냉장고에 보관하십시오. 후자의 경우 젤이 준비되면 아가로 오스 결정의 존재가 관찰되어야합니다. 일반적으로 젤을 사용하기 전에 몇 분 동안 윗면에서 젤이 실온으로 따뜻하게되면 사라집니다. 조심스럽게 빗을 떼어 내고 겔을 찢어 내지 말고 우물을 부수십시오. 아가로 오스 겔은 이제 사용할 준비가되었습니다. 즉시 사용하지 않을 경우 셀로판에 싸서 감기거나 녹지 않도록 냉장고의 플라스틱 용기에 보관해야합니다.