CTAB 추출 프로토콜

작가: Eric Farmer
창조 날짜: 3 3 월 2021
업데이트 날짜: 21 십일월 2024
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Plant DNA extraction - CTAB Method
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화합물 인 cetyltrimethylammonium bromide, hexadecyltrimethylammonium bromide, palmityltrimethylammonium bromide 및 cetrimonium bromide는 모두 CTAB에서도 알려져 있습니다. 이 화학 물질은 DNA 순차 게놈, 특히 식물의 pH 유지 인자로 사용됩니다.


밀링은 DNA 추출을 위해 식물의 세포벽을 파괴합니다. (Jason Reed / Ryan McVay / 디지털 비전 / 게티 이미지)

수식 CTAB

다양한 CTAB 화학 물질의 공식 량은 실험실에 따라 다릅니다. 그러나 모든 성분은 1 M Tris HCl pH 8.0, 0.5 M EDTA, 5 M NaCl 및 H 2 O (때때로 2 회 증류)를 포함한다. CTAB 성분의 경우 일부 실험실에서는 세틸 트리메틸 암모늄 브로마이드 및 기타 헥사 데실 트리메틸 암모늄 브로마이드를 사용합니다.

식물성 티슈 제조

식물 조직의 준비는 재료에 따라 다를 수 있습니다. 벽과 세포막은 파괴되지 않고 핵 물질에 접근 할 수 있어야합니다. 일반적으로 밀링 작업시 액체 질소가 함유 된 식물성 물질은 DNA에 접근하여 해로운 세포 효소와 비활성 화학 물질을 유지합니다.

서스펜션 및 원심 분리

분쇄 된 조직을 CTAB 날에 놓고 흐르는 물 한 그릇에 넣습니다. 그런 다음 클로로포름과 혼합하고 원심 분리하여 가용성 단백질과 다른 물질을 분리합니다. DNA는 수성 상으로부터 침전되고 조심스럽게 세척되어 오염 된 염을 제거한다. 이어서, 정제 된 DNA를 회수하고 TE 슬라이드 또는 멸균 증류수에 저장한다.